|
|
Příprava a charakterizace neutrální trehalasy pro strukturní studie
Šmídová, Aneta ; Obšilová, Veronika (vedoucí práce) ; Jiráček, Jiří (oponent)
Předkládaná diplomová práce je součástí projektu, jehož cílem je vyřešení struktury trehalasové domény neutrální trehalasy Nth1 pocházející ze Saccharomyces cerevisiae. Hlavním cílem této diplomové práce je příprava nových konstruktů kvasničné Nth1 a optimalizace jejich purifikačních protokolů, dále pak výběr nejvhodnějšího pufru pro hledání krystalografických podmínek pomocí metody diferenční skenovací fluorimetrie (DSF) a následná krystalizace připraveného proteinu. Další částí diplomové práce je stanovení enzymové aktivity Nth1 WT a jejích mutantních forem za přítomnosti proteinu Bmh1, dále pak ověření vazby trehalosy na vybrané konstrukty Nth1 pomocí DSF a mikrotermoforézy (MST) a následná krystalizace s trehalosou. Neutrální trehalasa se řadí mezi vysoce konzervované trehalasy, které byly objeveny v široké škále organismů. Tyto enzymy patří do třídy hydrolas, podskupiny glykosidas, hydrolyticky štěpí molekulu trehalosy na dvě molekuly glukosy. Trehalosa je přirozeně se vyskytující neredukující disacharid, který slouží v buňkách kvasinek jako zdroj uhlíku a energie a dále jako ochrana před stresy jako je např. tepelný šok. Hydrolýza trehalosy je životně důležitá pro létavý hmyz, neboť je přítomná jako hlavní cukerná složka hemolymfy hmyzu, proto inhibitory trehalas mohou být využity jako...
|
|
|
Studium stability katalytické domény neutrální trehalasy pomocí diferenční skenovací fluorimetrie
Šmídová, Aneta ; Obšilová, Veronika (vedoucí práce) ; Kacířová, Miroslava (oponent)
Předkládaná bakalářská práce je součástí projektu, jehož záměrem je krystalizace trehalasové domény neutrální trehalasy Nth1 ze Saccharomyces cerevisiae. Hlavním cílem této bakalářské práce je optimalizace purifikačního protokolu dvou různých konstruktů kvasničné Nth1 a určení optimálního pufru pro krystalografii těchto konstruktů pomocí metody diferenční skenovací fluorimetrie DSF. Trehalasy jsou důležité, vysoce konzervované enzymy, které se nacházejí v řadě organismů. Tyto enzymy patří do třídy hydrolas, podskupiny glykosidas a jejich společnou vlastností je to, že hydrolyticky štěpí molekulu trehalosy na dvě jednotky glukosy. Trehalosa je přirozeně se vyskytující neredukující disacharid, který slouží v buňkách kvasinek jako zásobárna uhlíku a energie a dále jako universální ochrana proti stresovým podmínkám. Trehalosa a její hydrolýza je důležitá v životním cyklu hmyzu, neboť je přítomná jako hlavní cukerná složka hemolymfy hmyzu, takže některé trehalasové inhibitory by mohly být využity jako insekticidy. Do této doby však byla vyřešena pouze jediná struktura trehalasy z prokaryotního organismu Escherichia coli. Z tohoto důvodu je velmi důležité vyřešit strukturu trehalasy z eukaryotního organismu. Klíčová slova Nth1, exprese, purifikace, DSF Klíčové předměty Proteinová biochemie, biofyzikální...
|
host ::
RSS.